I circadori olandesi combina CRISPR è bioluminescenza in una prova sperimentale permalatie infettive

Una nova proteina di notte sviluppata puderia accelerà è simplificà u diagnosticu di e malatie virali, secondu i circadori in l'Olanda.
U so studiu, publicatu u mercuri in ACS Publications, descrive un metudu sensitivu in un passu per analizà rapidamente l'acidi nucleici virali è u so aspettu utilizendu proteine ​​​​blu brillanti o verdi brillanti.
L'identificazione di i patogeni rilevandu e so impronte digitali di l'acidu nucleicu hè una strategia chjave in a diagnostica clinica, a ricerca biomedica è u monitoraghju di a sicurezza alimentaria è ambientale.I testi di reazione di a catena di polimerasi quantitative (PCR) largamente usati sò assai sensibili, ma necessitanu una preparazione sofisticata di campioni o interpretazione di i risultati, rendenduli impraticabili per certi paràmetri di assistenza sanitaria o paràmetri limitati di risorse.
Stu gruppu da i Paesi Bassi hè u risultatu di una cullaburazione trà i scientisti di l'università è l'uspitali per sviluppà un metudu di diagnosticu di l'acidu nucleicu veloce, portable è faciule d'utilizà chì pò esse applicatu in una varietà di paràmetri.
Sò stati ispirati da i lampi di luci, i bagliori di luci, è e stelle minuscule di fitoplancton acquaticu, tutti alimentati da un fenomenu chjamatu bioluminescenza.Stu effettu glow-in-the-dark hè causatu da una reazione chimica chì implica a proteina luciferase.I scientisti anu incorporatu proteine ​​​​di luciferase in sensori chì emettenu luce per facilità l'osservazione quandu trovanu un mira.Mentre chì questu rende questi sensori ideali per a rilevazione di u puntu di cura, ùn mancanu attualmente l'alta sensibilità necessaria per i testi di diagnostichi clinichi.Mentre u metudu di editazione di u genu CRISPR pò furnisce sta capacità, esige assai passi è equipaggiu specializatu supplementu per detectà u signale debule chì pò esse presente in campioni cumplessi è rumorosi.
I ricercatori anu truvatu un modu per cumminà una proteina ligata à CRISPR cun un signalu bioluminiscente chì pò esse rilevatu cù una camera digitale simplice.Per assicurà chì ci era abbastanza campione di RNA o DNA per l'analisi, i circadori anu realizatu l'amplificazione di polimerasi recombinase (RPA), una tecnica simplice chì opera à una temperatura constante di circa 100 ° F.Hanu sviluppatu una nova piattaforma chjamata Sensore di Acid Nucleic Luminescent (LUNAS), in quale e duie proteine ​​CRISPR / Cas9 sò specifiche per diverse porzioni contigue di u genoma virali, ognunu cù un fragmentu di luciferase unicu attaccatu sopra.
Quandu u genoma virali specificu chì l'investigatore esaminanu hè presente, duie proteine ​​​​CRISPR / Cas9 si liganu à a sequenza di l'acidu nucleicu di destinazione;diventanu in prossimità, chì permettenu a proteina luciferase intacta per furmà è emettenu luce blu in presenza di un sustrato chimicu..Per cuntà u sustrato cunsumatu in stu prucessu, i circadori anu utilizatu una reazione di cuntrollu chì emette luce verde.Un tubu chì cambia u culore da u verde à u blu indica un risultatu pusitivu.
I circadori anu pruvatu a so piattaforma sviluppendu l'assay RPA-LUNAS, chì detectaSARS-CoV-2 RNAsenza tedious isolamentu di RNA, è hà dimustratu a so prestazione diagnostica nantu à campioni di tamponi nasofaringei daCOVID 19pazienti.RPA-LUNAS hà rilevatu cù successu SARS-CoV-2 in 20 minuti in campioni cù una carica virale di RNA finu à 200 copie/μL.
I circadori credi chì u so esame pò detectà facilmente è efficacemente parechji altri virus."RPA-LUNAS hè attraente per e teste di malatie infettive in u puntu di cura", anu scrittu.